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貂肺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法

貂肺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法

　　1）表皮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1．取材：取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。

　　2．EDTA處理：先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。

　　3．(貂肺上皮細(xì)胞)冷消化：換入0.25%胰蛋白酶中，置4℃過夜。

　　4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。

　　5．溫消化：取出表皮單獨(dú)處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25%胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分鐘。

　　6．用吸管輕輕反復(fù)吹打，使成細(xì)胞懸液。

　　7．(貂肺上皮細(xì)胞)培養(yǎng)液：通過80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和20%小牛血清，制成細(xì)胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。

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