出品公司:	ATCC
細胞名稱:	ATCC CRL-2579~RKO-AS45-1~人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞
存儲人:	MC Hollander, AJ Fornace
種屬來源:	人
組織來源:	結(jié)腸
疾病特征:	結(jié)腸癌
細胞形態(tài):	上皮細胞樣
生長特性:	貼壁生長
培養(yǎng)基:	MEM培養(yǎng)基(MEM，GIBCO，貨號41500034)，90%；FBS，10%。
產(chǎn)品目錄號:	CRL-2579
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37  ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
**等級:	2
應(yīng)用:	該細胞可以參與細胞周期調(diào)控和DNA修復(fù)蛋白的相互作用。
聯(lián)系方法:	何經(jīng)理，合肥星肽生物科技有限公司，Tel：0551-63802898     400-8702-898    E-mail：info@qingbio.com 網(wǎng)址：http://www.28888123.cn     QQ:514713116

ATCC CRL-2579~RKO-AS45-1~人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞特點和簡介

  人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框克隆到表達載體pCMV.3中，轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細胞RKO，建立了RKO-AS45-1細胞株。 該細胞含有穩(wěn)定整合巨細胞病毒（CMV）啟動子的表達載體。 RKO-AS45-1細胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45對DNA修復(fù)、凋亡和藥物敏感性研究。 在本庫通過支原體檢測。 在本庫通過STR檢測。

ATCC CRL-2579~RKO-AS45-1~人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞接受后處理

1) 收到ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基。

5) 接到ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián) 系。

ATCC CRL-2579~RKO-AS45-1~人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基 混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜） 。**天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作 臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫落后， 加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清 和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液 ，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

ATCC CRL-2579~RKO-AS45-1~人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞培養(yǎng)注意事項

1.收到ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔 。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞 仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再 次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜?費寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞匯合度 80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6. 建議客戶收到ATCC CRL-2579(RKO-AS45-1)細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 ******* 技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細胞僅供科研使用。

  合肥星肽生物科技有限公司作為美國ATCC專業(yè)代理商，專業(yè)經(jīng)營ATCC菌種、ATCC原代細胞、培養(yǎng)基、抗體、生物試劑、耗材等，合肥星肽生物科技有限公司與ATCC共同努力致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務(wù)，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到*終售后的確保項目準確到位，都有相關(guān)專業(yè)人士進行維護,確保您在合肥星肽生物科技有限公司獲得*上等服務(wù)！

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