細胞簡介：

人真皮成纖維細胞分離自真皮組織， 真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性

纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有

韌性。其由兩層組成一乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。成纖維細胞

( Fib roblast) 是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為

突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱

堿性， 具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在—定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的

細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基

中。30m i n細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足， 表現(xiàn)為小的突起； 6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分

布較均勻，散在生長， 不聚集成團；細胞生長迅速， 5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長， 平坦、胞

體較大，細胞質透明，細胞核較大， 呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的

扁平分布。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括構造和維持組織的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質以及組

織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

1) 收到非紅系有核細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系。

人真皮成纖維細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

人真皮成纖維細胞培養(yǎng)注意事項

1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。

  合肥星肽生物科技有限公司作為美國ATCC專業(yè)代理商，專業(yè)經(jīng)營ATCC菌種、ATCC原代細胞、培養(yǎng)基、抗體、生物試劑、耗材等，合肥星肽生物科技有限公司與ATCC共同努力致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到*終售后的確保項目準確到位，都有相關專業(yè)人士進行維護,確保您在合肥星肽生物科技有限公司獲得*上等服務！

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人真皮成纖維細胞說明書pdf版和相關資料下載

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