固相合成多肽的反應原理
固相中的接肽(固相合成多肽)反應原理與液相中的基本一致,將兩個相應的氨基被保護的及羧基被保護的氨基酸放在溶液內并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經常用的手段是將羧基活化,變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的失去劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對稱酸酐法、活化酯法接肽應用*廣。
裂解及(固相合成多肽)合成肽鏈的純化 BOC法用TFA+HF裂解和脫側鏈保護基,FMOC法直接用TFA,有時根據條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細管電泳等。
典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×100(3-10μm)和25×250mm(10μ m)。
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